---

name: troubleshoot-separation locale: wenyan source_locale: en source_commit: 82c77053 fence_basis_commit: 82c77053 translator: "Julius Brussee homage — caveman" translation_date: "2026-05-03" description: > Systematically diagnose and resolve chromatographic separation problems: document symptoms, identify root causes for peak shape and retention anomalies, evaluate matrix effects, and implement targeted fixes using a one-variable-at-a-time approach for GC and HPLC systems. license: MIT allowed-tools: Read Grep Glob WebFetch WebSearch metadata: author: Philipp Thoss version: "1.0" domain: chromatography complexity: intermediate language: natural tags: chromatography, troubleshooting, peak-shape, resolution, matrix-effects

排層析分離之疾

GC 與 HPLC 分離疾之系統診療：症之記、峰形之診、保留異常之究、基質效應之評、以一變即一試之法行修而驗。

用時

• 峰拖、前傾、分裂、或寬於所期
• 保留時偏移或不可重現
• 關鍵對之分辨已退
• 基線飄、鬼峰、或負峰現
• 靈敏降或信噪比劣
• 昔可之法今敗於系統適性

入

必要

• 問題層析圖：示疾之當前數據
• 參考層析圖：同法近期之良圖以資較
• 法之條件：柱、流動相/載氣、溫/梯、檢、流率
• 系統之記：近修、柱換、流動相備、儀事

可選

• 空白層析圖：最近之空白或溶劑注
• 系統適性趨勢：拖、辨、塔板、保留之歷值
• 柱之歷：注數、樣類、柱齡
• 儀修之記：泵封換、燈時、檢服日

法

第一步：記其疾

1. 精述其症：何峰受影、與參考圖何異
2. 定其始：漸退抑驟發
3. 記其影所有峰抑特定者
4. 記其於標、樣、抑兼之
5. 聚當前系統適性數而較歷趨
6. 攝或導出問題圖與參考並列

得：問題之述已成，含時、範（諸峰抑特峰、標抑樣）、與參考數之較。

敗則：無參考圖者，依所記之法注新標備以立當前基線而後排診。

第二步：診峰形之疾

以症表辨可能之根因。

症	可能之因	解
拖（T > 1.5）	二次相互（矽醇活）、接頭死容、柱濾污、活位過載	加胺改質劑（HPLC）、襯管去活（GC）、換濾、修柱口、減注量
前傾（T < 0.8）	柱過載（質或容）、樣溶劑與流動相強度不合	減注量或濃度、以弱溶劑稀釋、用大徑柱
分裂/雙峰	濾半堵、柱頭空、二多形、異構互轉	換濾、重填柱頭、驗樣穩、調 pH 鎖一形
峰寬（諸峰）	柱外帶展、管徑誤、檢池大、柱老、塔板少	減柱後管之長與徑、察接、換柱
峰寬（早出）	柱頭聚焦差、注溶劑過強（HPLC）、冷柱注（GC）	用弱注溶劑、減注量、增初爐溫
峰寬（晚出）	柱內擴散、溫過低（GC）、梯度不陡（HPLC）	增終爐溫、陡梯、加有機洗
負峰	樣溶劑折射/吸收異於流動相、空位峰（IEX）	樣溶劑與流動相合、用異波長
鬼峰	前注遺、流動相污、柱漏、隔漏（GC）	注空白以驗、清或換注系、濾/脫流動相、換隔
基線飄（向上）	柱漏（GC 高溫）、梯度洗脫之基線移（HPLC）、燈不穩（UV）	降最高溫、用低漏柱（GC）、行空白梯以特徵之（HPLC）、換燈
基線噪（高頻）	電干擾、泵脈、檢中氣泡、檢污	接地、換泵封、脫流動相、清檢池

1. 合所察之症於上表
2. 依疾影諸峰抑特峰、驟發抑漸退以縮因之列
3. 依系統歷（近變、柱齡、修狀）排最可能之因

得：自症因映射識一二最可能之根因，依系統歷排序。

敗則：症不合表中任行，或多症並存者，疾或為複合（如柱退兼有漏）。先理最顯者，再評。

第三步：診保留時之疾

症	可能之因	解
諸峰皆早	流率增、柱溫高、流動相強、柱空	察流率設與實出、驗溫、重備流動相、察柱
諸峰皆晚	流率減、柱溫低、流動相弱、管半堵	察漏（壓降）、驗溫、重備流動相、察線濾
保留時飄（漸）	柱退、流動相蒸發（開儲）、溫變	換柱、封儲、穩爐、用柱恆溫
保留時不重現	接頭漏、止回閥敗、自注時誤、平衡不足	壓試接、換止回閥、驗自注、增平衡量
失保留（k' 近 0）	相塌（RP 高水）、柱去濕、流動相誤、接反	用極性嵌入或 AQ 型柱、以有機重濕、驗流動相、察管路
共出（昔已分）	柱選擇性失（鍵相剝）、流動相組變、溫變	換柱、驗流動相備、察溫設與實

1. 定保留偏為均（諸峰）抑選（特峰）
2. 均偏指系統因（流、溫、流動相組）
3. 選偏指柱化變或特分析物之疾
4. 察儀壓跡：壓驟變指漏或堵
5. 重注參考標以確疾在系抑在樣

得：保留異常之根因明，分為系統（儀/流動相）抑柱關。

敗則：以新柱注標而疾解者，原柱為疾。新柱仍疾者，因在上游（流動相、儀、或法之參）。

第四步：評基質效應

1. 較標圖與樣圖：
   • 樣中有標所無之峰乎？
   • 特定保留窗中基線升或噪乎？
   • 樣與標中分析物峰形異乎（更寬、拖更甚）？
2. LC-MS：評離子抑/增：
   • 柱後注入試：續注分析物而注空白基質提取液；分析物信凹處示離子抑區
   • 分析物保留時與抑區合者，改法以移分析物洗脫
3. 察柱污：
   • 樣序後注溶劑空白；持峰示柱污
   • 以強溶劑沖柱（RP 為 100% 有機，或依柱廠之囑）
4. 評樣備：
   • 注器污（自注針、GC 注口襯）：換或清
   • 樣清不足：加濾、SPE、或蛋白沉之步
5. GC：察注襯中非揮發殘積，致久而拖、鬼峰

得：基質效應已特徵化（干擾物之有無、LC-MS 之離子抑區、柱污狀），有可行之囑。

敗則：以可得數不能足以特徵基質效應者，備基質匹配校曲與溶劑校曲較斜率。斜率差 > 15% 示重大基質效應，需法之改。

第五步：施修而驗

1. 每次唯改一變。記何變何故。
2. 每變後，重注系統適性標而較參考圖。
3. 嘗試之序（自輕至重）：
   • 備新流動相 / 載氣瓶
   • 換耗材（隔、襯、濾、線濾、燈）
   • 緊或換接與管
   • 沖/再生柱
   • 調法之參（溫、流、梯、pH）
   • 換柱
   • 修儀（泵封、止回閥、檢）
4. 修一既明，行全系統適性試（n >= 5 注）。
5. 較諸參（保留時、面、辨、拖、塔板）於歷規。
6. 記根因、修動、與驗果於儀/柱日記。
7. 同疾再現者，立預修之程以本而治之。

得：疾解，系統適性參復規。根因、修動、與驗已記。

敗則：諸單變之改皆敗者，疾或涉多敗並存。盡換耗材與柱，以新標驗，自新基線重建排診。耗材盡換而疾仍存者，升至儀服。

驗

• 疾已記，含症述、時、範
• 根因依症因映射表識
• 排診中每次唯改一變
• 修以系統適性試驗（n >= 5 注）
• 諸系統適性參皆復至規內
• 根因與修動已記於日記
• 預修之策已定以免再發

陷

• 多變並改：不可辨真根因。常變一物、試之、再決變他物。
• 先換柱：柱換貴，且或掩真疾（如漏、流動相誤、注口污）。先盡簡因。
• 忽儀日記：諸疾多溯近修事、流動相批變、或柱換。常察近何變。
• 無證罪樣：先注參考標。標亦示疾者，疾在系，非在樣。
• 以不合溶劑沖柱：勿以純水沖逆相柱（致相塌），或以純水緩衝液沖矽 HILIC 柱（不可逆損）。依廠洗之程。
• 不記所試：敗之嘗試亦寶。記每變與其果，免重蹈敗解，且建機構之知。

參

• interpret-chromatogram -- 解層析數，揭分離疾
• develop-gc-method -- GC 法之開，於排診需重設法時用之
• develop-hplc-method -- HPLC 法之開，於排診需重設法時用之
• validate-analytical-method -- 排診中重大法變之後，或需重驗